Куликов А. А.
Глазова М.В.
Горбачева Е.Л.
Черниговская Е.В.

Известно, что эпилептические припадки приводят к нейрональной гибели. Основными процессами, участвующими в гибели и выживаемости нейронов, являются апоптоз и аутофгия. Целью работы было исследование процессов апоптоза и аутофагии на разных стадия аудиогенного киндинга у крыс линии Крушинского-Молодкиной (КМ).

Методы: В исследование были использованы крысы линии КМ, характеризующиеся склонностью к аудиогенным судорожным припадкам (АПС), перенесшие 4, 7 и 25 АСП. Крысы выводились из эксперимента через 24 ч или через 7 дней после последней звуковой стимуляции. Содержание и активность белков апоптоза и аутофагии (р53, casp3,8,9; cytC, Mcl1, Bcl2, Beclin-1, p62, LC3) оценивались методом Вестерн блоттинга. Для выявления локализации и уровня апоптоза использовался метод TUNEL. Методом иммуногистохимического окрашивания оценивалась локализация clCasp3. Также использовалось иммуногистохимическое окрашивание на LC3 и Cath D.

Результаты: Мы показали, что 4-х АСП не достаточно для инициации аутофагии и апоптоза. Тогда как после 7 АСП отмечено увеличение содержания про-апоптического белка р53 и уменьшение содержания антиапоптического белка Bcl2, а также увеличение количества Tunel-позитивных клеток. Активация апоптоза проиводила к уменьшению количества гранулярных клеток в зубчатой извилине.

Через неделю после 7 АСП происходит активация аутофагии, которая может частично обеспечивать восстановление числа гранулярных клеток на фоне показанного ранее повышенного нейрогенеза.

После 25 АПС мы не выявили активации ни апоптоза, ни аутофагии. Однако показано достоверное снижение числа клеток во всех исследуемых отделах гиппокампа (в гранулярном слое зубчатой извилины, хилусе, и поле СА3), что свидетельствует о массовой гибели клеток на более ранних стадиях аудиогенного киндинга.

Заключение: Мы показали, что в ходе эпилептогенеза апоптотическая гибель и активация аутофагии происходит на ранних стадиях формирования лимбической эпилепсии. И мы предполагаем, что эти процессы активно участвуют в эпилептогенезе и реорганизации гиппокампальных связей.

0